Domięśniowe podanie wirusa parapleginy ratuje aksonopatię obwodową w modelu dziedzicznej paraplegii spastycznej ad 10

Preparaty ponownie płukano 3 razy w PBS, osadzano w Vectashield na standardowych szklanych szkiełkach (Vector Laboratories) i badano pod konfokalnym skaningowym mikroskopem laserowym. Neuropatologia. Semithin i ultracienkie analizy morfologiczne przeprowadzono w sposób opisany wcześniej (34, 35). Myszy znieczulono dootrzewnowo za pomocą inertyny i perfundowano 4% paraformaldehydem w PBS. Nerwy kulszowe i rdzeń kręgowy usunięto, utrwalono w 0,12 M buforze fosforanowym i 2% aldehydem glutarowym, a następnie podzielono poprzecznie na 2-mm bloki, ponownie utrwalono czterotlenkiem osmu i osadzono w Epon (Sigma-Aldrich). Przekroje poprzeczne wycięto z dystalnej części nerwu kulszowego i szyjkowej części rdzenia kręgowego. Analizy morfometryczne. Odsetek nieprawidłowych aksonów w sekcjach semityny zliczono w 3 losowych przekrojach na nerw kulszowy. Dla każdego nerwu oceniano co najmniej 300 aksonów. Do kwantyfikacji ultrastrukturalnych nieprawidłowości mitochondriów analizowano średnią 10 pól na nerw. W każdym przypadku uzyskaliśmy co najmniej 100 aksonów. Analizy przeprowadzono na zdjęciach zrobionych przy użyciu mikroskopu elektronowego (powiększenie × 4000). Wszystkie pomiary morfometryczne wykonano w sposób zaślepiony i nieuzgodniony, z traktowaniem zwierzęcia nieznanego eksperymentatorowi. Rotarod. Wydajność silnika oceniano za pomocą aparatu Rota-Rod (model przyspieszający; Ugo Basile). Każdy Spg7. /. Grupa eksperymentalna składała się z 13 zwierząt pochodzących z różnych miotów. Grupa myszy WT składała się z 9 myszy. Wszystkie zwierzęta miały 3 miesiące, kiedy rozpoczęła się analiza. Wszystkie zwierzęta badano na rotarod raz w miesiącu od momentu wstrzyknięcia. Myszy umieszczano na drążku przyspieszającym z prędkością początkową 4 obrotów na minutę, osiągając końcową prędkość 40 obrotów na minutę w ciągu 5 minut. Zwierzęta pozostawiono na pręcie na maksimum 300 sekund, a czas chwytania na pręcie został oceniony. Statystyka. Dane są wyrażone jako średnia. SEM. Analizę statystyczną pomiarów morfometrycznych przeprowadzono przy użyciu dwustronnego niesparowanego testu Student. Analizę statystyczną aktywności rotarod przeprowadzono za pomocą niesparowanego testu dwustronnego z dwoma ogonami w każdym punkcie czasowym między AAV-LacZ. i grupy traktowane AAV-Spg7 (3. Ponadto wykonaliśmy jednokierunkową analizę wariancji (ANOVA) w celu porównania wydajności rotaroda w trakcie badania w każdej grupie eksperymentalnej. Materiały uzupełniające Zobacz Dodatkowe dane Podziękowania Autorzy pragną podziękować Diego Di Bernardo, Graciana Diez-Roux i Enrico Surace za pomocne komentarze i dyskusje. Prace te zostały wsparte przez Fundację Telethon i dotacje dla Stowarzyszenia Dystrybucji Mięśni (dla EI Rugarli) oraz przez Sieć Diagnozy Molekularnej (DiMi) Doskonałości Wspólnoty Europejskiej (dla A. Auricchio). Przypisy Niestandardowe skróty: AAV, wirus związany z adenowirusem; ALS, stwardnienie zanikowe boczne; GC, kopie genomu; HSP, dziedziczna paraplegia spastyczna. Konflikt interesów: Autorzy zadeklarowali brak konfliktu interesów. Informacje referencyjne: J. Clin. Invest.116: 202. 208 (2006). doi: 10.1172 / JCI26210 Obecny adres Elena I. Rugarli to: Wydział Biochemii i Genetyki, Narodowy Instytut Neurologiczny, Mediolan, Włochy.
[przypisy: andzela allegro, bazofile podwyższone, co decyduje o stopniu zagrożenia życia poparzonego ]