Wczesne niepowodzenie punktu kontrolnego G2 / M jako mechanizmu molekularnego leżącego u podłoża aberracji chromosomowych wywołanych etopozydami czesc 4

Istnieją kontrowersje związane z tym, czy związane z DNA zatrzymanie mitotyczne istnieje, czy nie. Odpowiedzieliśmy na to pytanie za pomocą testu zatrzymania mitotycznego. M komórki fazy fibroblastów pozbawionych ATM wzbogacono do czystości 90% przez wytrząsanie po traktowaniu 0 lub 4 .M etopozydu przez 3 godziny (wskazane jako 0 godzin; Figura 2D). W przypadku braku etopozydu … [Read more…]

Wczesne niepowodzenie punktu kontrolnego G2 / M jako mechanizmu molekularnego leżącego u podłoża aberracji chromosomowych wywołanych etopozydami cd

Odkrycia w komórkach BV173 doprowadziły nas do hipotezy, że zakłócenie punktów kontrolnych G2 / M może pozwolić na wejście uszkodzonych komórek do mitozy, prowadząc następnie do segregacji sygnałów sondy 11q23 w M lub pomitycznej fazie G1. W celu zebrania komórek w fazach G2, M i postmitotycznych G1 w obecności etopozydu, zastosowano komórki adherentne, w których … [Read more…]

Wczesne niepowodzenie punktu kontrolnego G2 / M jako mechanizmu molekularnego leżącego u podłoża aberracji chromosomowych wywołanych etopozydami ad

Zmiany w komponentach w tej sieci zwiększają ryzyko rozwoju raka (23, 24). Pokrewne od DNA DSB wywołane etopozydami aktywują tę sieć także w fazie S-to-G2, tak że komórki akumulują się w komórkach G2 (25 27 27) lub w bardziej zniszczonych komórkach ulegają apoptozie (28). W komórkach zatrzymanych w fazie G2 chromatydy siostrzane pozostają w parze … [Read more…]

Wczesne niepowodzenie punktu kontrolnego G2 / M jako mechanizmu molekularnego leżącego u podłoża aberracji chromosomowych wywołanych etopozydami

Inhibitory topoizomerazy II (Topo II) są specyficznymi dla cyklu komórkowego czynnikami uszkadzającymi DNA i często korelują z białaczką wtórną z translokacjami chromosomalnymi obejmującymi gen białaczki mieszanej – białaczka limfocytowa / mieloidalna (MLL) na chromosomie 11 pasma q23 (11q23). Pomimo znaczenia klinicznego, mechanizm molekularny dla tej translokacji chromosomowej nie został jeszcze wyjaśniony. W tym badaniu wykorzystaliśmy … [Read more…]

Domięśniowe podanie wirusa parapleginy ratuje aksonopatię obwodową w modelu dziedzicznej paraplegii spastycznej ad 10

Preparaty ponownie płukano 3 razy w PBS, osadzano w Vectashield na standardowych szklanych szkiełkach (Vector Laboratories) i badano pod konfokalnym skaningowym mikroskopem laserowym. Neuropatologia. Semithin i ultracienkie analizy morfologiczne przeprowadzono w sposób opisany wcześniej (34, 35). Myszy znieczulono dootrzewnowo za pomocą inertyny i perfundowano 4% paraformaldehydem w PBS. Nerwy kulszowe i rdzeń kręgowy usunięto, utrwalono … [Read more…]

Domięśniowe podanie wirusa parapleginy ratuje aksonopatię obwodową w modelu dziedzicznej paraplegii spastycznej ad 9

Całkowitą dawkę 1011 GC każdego preparatu wektorowego wstrzyknięto 3 różnym miejscom brzuchatego łydki (3 wstrzyknięcia po 30 ul), stosując strzykawkę Hamiltona o masie 100 jl. Alternatywnie, 1012 GC AAV2 / wstrzyknięto do żył ogonowych myszy C57BL / 6 (n = 3). W celu barwienia LacZ zwierzęta uśmiercono 4 tygodnie po iniekcji i perfundowano przezsercowo 2% … [Read more…]

Domięśniowe podanie wirusa parapleginy ratuje aksonopatię obwodową w modelu dziedzicznej paraplegii spastycznej ad 8

Rzeczywiście, mitochondria są wysoce dynamicznymi organellami, których kształt i funkcja podlegają regulacji. Warto zauważyć, że defekty genów regulujących morfologię mitochondriów stają się ważną przyczyną neuropatii u ludzi (24-26), co sugeruje, że kompleksowa kontrola morfologii mitochondriów może istnieć w neuronach i może być ważna dla funkcji aksonalnej. Ponadto zauważyliśmy, że akumulacja mitochondriów uprzednio obserwowana w dotkniętych … [Read more…]

Domięśniowe podanie wirusa parapleginy ratuje aksonopatię obwodową w modelu dziedzicznej paraplegii spastycznej ad 7

Z tych powodów, wektory AAV są testowane w badaniach klinicznych na ludziach (21). Wcześniejsze badania osiągnęły nieco sprzeczne wyniki dotyczące skuteczności wstecznego transdukcji neuronów ruchowych kręgosłupa po wstrzyknięciu wektorów AAV w mięśniu szkieletowym (13, 22). W najbardziej udanym badaniu wykorzystano wektory AAV2 / 2 do dostarczania IGF-1 w mysim modelu ALS, wykazując znaczące wydłużenie przeżycia … [Read more…]

Domięśniowe podanie wirusa parapleginy ratuje aksonopatię obwodową w modelu dziedzicznej paraplegii spastycznej ad 6

Myszy traktowane obustronnie wektorem AAV-Spg7 wykazywały postępującą lepszą wydajność w porównaniu z Spg7 (3 /. myszy wstrzyknięto obustronnie za pomocą wektora AAV-LacZ. Gdzie znaczące, wartości P dla indywidualnego testu ucznia pomiędzy 2 grupami leczonego Spg7 (3 /. myszy są pokazane. Ponadto, myszy leczone AAV2 / 2-Spg7 wykazywały statystycznie istotną różnicę w ich działaniu w trakcie … [Read more…]

Domięśniowe podanie wirusa parapleginy ratuje aksonopatię obwodową w modelu dziedzicznej paraplegii spastycznej ad 5

W tym celu przeprowadziliśmy badania ultrastrukturalne w grupie zwierząt, którym wstrzyknięto wektory AAV2 / 2 i odkryliśmy, że liczba aksonów zawierających nieprawidłowe mitochondria i nagromadzenie neurofilamentów i innych agregatów była znacząco zmniejszona w nerwie kulszowym od strony traktowanej AAV2 / 2-Spg7 w porównaniu ze stroną wstrzykniętą AAV-LacZy (Figura 5). Co uderzające, kwantyfikacja wykazała, że procent … [Read more…]