Pojedyncza mutacja nukleotydowa w mysim promotorze reniny zakłóca regulację ciśnienia krwi ad 5

Aby zainicjować tę reakcję in vivo, przekroczyliśmy rodzicielskie linie Ren-1C TgM z TgM, w której powszechnie występuje ekspresja rekombinazy Cre i uzyskano szczenięta niosące oba Tg (Cre-F0). Poszczególne myszy, które przeszły rekombinację, jak określono za pomocą analizy Southern blot (dane nie przedstawione), skrzyżowano ze zwierzętami innymi niż Tg, a genotypy potomstwa (Cre-F1) zostały rozróżnione przez … [Read more…]

Pojedyncza mutacja nukleotydowa w mysim promotorze reniny zakłóca regulację ciśnienia krwi czesc 4

Wektory ukierunkowane obejmowały kasetę genu oporności na kanamycynę (Kanr) jako markera selekcyjnego w E. coli, jak również sekwencje promotora WT i mut, które były oflankowane przez sekwencje homologiczne do genu Ren-1C. W wektorze kierującym RP-2 ((Figura 1C), na przykład, sekwencje promotora WT i mut były identyczne, z wyjątkiem pz, a obie są oflankowane zestawem wariantów … [Read more…]

Pojedyncza mutacja nukleotydowa w mysim promotorze reniny zakłóca regulację ciśnienia krwi ad

Co ciekawe, ekspresja Ren-1 i Ren-2 różnią się znacznie w SMG, gdzie ekspresja Ren-2 jest ponad 100-krotnie wyższa niż w Ren-1 (7). Z powodu braku odpowiednich linii komórkowych, postęp w analizie transkrypcji genu reniny był powolny i generalnie wykorzystywał komórki wyrażające reninę spoza nerki lub komórki, które zazwyczaj nie wytwarzają reniny (8. 10). Jednakże w … [Read more…]

Pojedyncza mutacja nukleotydowa w mysim promotorze reniny zakłóca regulację ciśnienia krwi

Renin, główny składnik regulatorowy układu renina-angiotensyna, odgrywa kluczową rolę w regulacji ciśnienia krwi i homeostazy elektrolitów i jest głównie wyrażany w nerce. W obrębie promotorów genu reniny zidentyfikowano kilka elementów reagujących na cAMP. Tutaj badamy, w jaki sposób 2 takie elementy, element bliższego promotora reniny-2 (RP-2) i zachodzące na siebie cAMP i negatywne elementy regulatorowe … [Read more…]

Wczesne niepowodzenie punktu kontrolnego G2 / M jako mechanizmu molekularnego leżącego u podłoża aberracji chromosomowych wywołanych etopozydami ad 13

Preparaty barwiono PI (2,5 .g / ml), a komety analizowano przy użyciu odwróconego mikroskopu epifluorescencyjnego przy powiększeniu x20. Na koniec analizowano 70 komórek na szkiełko przy użyciu Scion Image (Scion Corp.) z makroskopem kometowym scion_comet1.3 (49) dla momentu ogona. Test inkorporacji BrdU. Fibroblasty pozbawione ATM pozytytycznego G1 inkubowano z 10. M BrdU z lub bez … [Read more…]

Wczesne niepowodzenie punktu kontrolnego G2 / M jako mechanizmu molekularnego leżącego u podłoża aberracji chromosomowych wywołanych etopozydami ad 12

Jako kontrole, komórki GM05849C traktowano 0 lub 1. M etopozydem w warunkach asynchronicznych przez 150 minut, a następnie uwalniano i hodowano bez etopozydu przez 20 dni. RYBY i statystyki. Bakteryjne sztuczne sondy chromosomowe (RP11-30E1, RP11-59N1) flankujące centromerowe i telomerowe końce genu MLL (sondy 11q23) izolowano w oparciu o bazę danych dostarczoną przez University of California. … [Read more…]

Wczesne niepowodzenie punktu kontrolnego G2 / M jako mechanizmu molekularnego leżącego u podłoża aberracji chromosomowych wywołanych etopozydami ad 11

Komórki zebrano i utrwalono 0,34% formaldehydem, a następnie permeabilizowano 90% metanolem. Komórki barwiono monoklonalnym przeciwciałem fosfohistonowym H3 (Cell Signaling Technology), a następnie sprzężone z FITC przeciwciało drugorzędowe przeciw myszy (Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc.) i barwienie PI, a następnie ponad 10 000 komórek analizowano za pomocą cytometrii przepływowej. W przypadku testu z pominięciem fazy M komórki … [Read more…]

Wczesne niepowodzenie punktu kontrolnego G2 / M jako mechanizmu molekularnego leżącego u podłoża aberracji chromosomowych wywołanych etopozydami ad 10

Wraz z danymi klinicznymi, w których skumulowana dawka epipodofilotoksyny nie wydaje się mieć pierwszorzędnego znaczenia dla określenia ryzyka wystąpienia wtórnej białaczki (6), nasze wyniki są zgodne z interpretacją, że ograniczone okno stężenia inhibitora Topo II powoduje translokacje chromosomów. Nasze dane wskazują również, że translokacje chromosomowe indukowane przez etopozydy nie są ograniczone do locus MLL i … [Read more…]

Wczesne niepowodzenie punktu kontrolnego G2 / M jako mechanizmu molekularnego leżącego u podłoża aberracji chromosomowych wywołanych etopozydami ad 9

Frakcja komórek, które nabyły translokacje chromosomów podczas fazy G2 do postmitotycznych faz G1, zachowała wystarczającą integralność funkcjonalną w celu kontynuacji proliferacji, co powoduje selekcję stabilnych translokacji chromosomu 11, jak zaobserwowano w hodowlach długoterminowych (Figury 5F i 6). W świetle istnienia 11q23 segmentów w mikrojądrach bez regionów centromerowych, jak również trwałych DSB DNA w mitozie w … [Read more…]