Pochodzenie ziarniniakowej dominującej limfocytu z klonalnej ekspansji wysoko zmutowanych komórek B zarodkowego jądra cd

Ponadto dwie próbki biopsyjne uzyskane od pacjenta w odstępie dziewięciu miesięcy miały identyczne sekwencje VH. W przeciwieństwie do rearanżacji genu VH we wszystkich pojedynczych limfocytach B z hiperplastycznych migdałków i pacjentów z guzkową chorobą limfocytową dominującą limfocytów nie były powiązane ze sobą, z rearanżacjami w komórkach L & H, i sekwencjami z banku danych (uwolnienie GenBank 98). ). Mutacje Somatyczne
Przestawione geny VH komórek L & H ze wszystkich 11 pacjentów zawierały od 11 do 40 podstawień nukleotydów (7,5 do 27,2 procent), gdy porównano je z odpowiednimi segmentami linii zarodkowej. Większość mutacji była zlokalizowana w regionie determinującym komplementarność (CDR) 2 (średnia częstość mutacji w CDR2, 21,6 procent), podczas gdy region zrębowy 3 był mniej dotknięty (średnia mutacja, 8 procent).
Tabela 2. Tabela 2. Molekularne cechy immunoglobulin ciężkich i lekkich łańcuchów w komórkach L & H 11 pacjentów z ziarniniakowatością dominującą limfocytów. Wśród tych klonów z hypermutowanymi komórkami L & H, sześć miało różnorodność wewnątrzkanałową (Tabela 2 i Figura 1B). W komórkach L & H od dwóch pacjentów zdolność kodowania genów VH została zakłócona przez mutacje. W Patencie 4, geny VH wszystkich 13 komórek L & H zostały wyciszone przez dwa kodony stop i przesunięcie w ramce odczytu. W Pacjent 7 zdolność kodowania została tylko częściowo utracona, ponieważ w 11 z 13 komórek L & H był kodon stop w regionie zrębowym 3.
Transkrypty łańcuchów lekkich immunoglobulin
U 6 z 11 pacjentów zastosowano hybrydyzację in situ zamrożonej tkanki do badania transkryptów lekkich łańcuchów immunoglobulin. U wszystkich sześciu pacjentów limfocyty L & H wykazywały umiarkowanie silne znakowanie dla immunoglobulinowego łańcucha sygnałowego kappa lekkiego immunoglobuliny, ale nie były one znakowane przez sondę antysensowną lambda immunoglobulin lekkich łańcuchów (tabela 2). Obie sondy dla lekkich łańcuchów immunoglobulin oznaczały komórki plazmatyczne silnie i słabo zaznaczały część reaktywnych komórek limfatycznych. Sensowne sondy produkowały tylko sygnały tła.
Dyskusja
Ogólnie przyjmuje się, że komórki L & H mają fenotyp komórek B, ale ich klonalność jest kontrowersyjna. Aby wyjaśnić tę kwestię, przebadaliśmy zmienione geny VH w poszczególnych komórkach L & H izolowanych z zamrożonych skrawków tkanki od 11 pacjentów z dominującą guzkową chorobą limfocytu. Zidentyfikowaliśmy komórki morfologicznie i markerem komórek B CD20. Komórki L & H u każdego pacjenta miały takie same przegrupowanie genów VH. To odkrycie potwierdziło, że komórki L & H były komórkami B (ponieważ tylko komórki B zawierają przegrupowane geny VH) i wykazały, że komórki L & H powstają w wyniku ekspansji klonalnej. Klonalność tych komórek została dodatkowo udowodniona przez monotypową ekspresję transkryptów lekkich łańcuchów immunoglobulin, co jest zgodne z wcześniejszymi badaniami17-19.
Poprzednie badania za pomocą jednokomórkowej PCR zarówno dominującego limfocytarnego węzła chłonnego12,16,28, jak i klasycznego rodzaju choroby Hodgkina miały niezgodne wyniki.16,22,28. Rozbieżności te były najprawdopodobniej spowodowane trudnościami z techniką izolacji komórek, między innymi które problemy z amplifikacją zanieczyszczających sekwencji VH są najpoważniejsze
[przypisy: bupropion, hurtownia portfeli, diltiazem ]
[więcej w: bartoneloza, bazofile niski poziom, bazofile podwyższone ]