Pojedyncza mutacja nukleotydowa w mysim promotorze reniny zakłóca regulację ciśnienia krwi ad 6

Poniżej, względną wartość reniny / GAPDH dla każdej pojedynczej myszy obliczono dla genów reniny zarówno obu Tg, jak i endogennych (endo) i znormalizowano do średniej wartości męskiej grupy WT, arbitralnie ustawionej na 100. Wartości są średnie. SD. Wyrażenie Extrarenal Tg. Ekspresję genu Renin opisano w tkankach nadnercza, takich jak SMG, nadnercza, serce, jądro i jajnik (Figura 3E) (3, 12). Wyekstrahowaliśmy całkowity RNA z różnych tkanek zewnątrznerkowych TgM i analizowaliśmy ekspresję genów przy użyciu zestawów starterów RT-PCR specyficznych dla endogennego Ren-1C (Figura 3E), Tg Ren-1C (Figura 3, F. H) i Gapdh (Figura 3, E (H)). Chociaż dokładne porównanie ilościowe było trudne ze względu na niski poziom ekspresji w tych próbkach, nie zaobserwowano żadnej różnicy w ekspresji Tc zewnątrznerkowej między WT a mutacją CNRE TgM (Figura 3F). Aby dokładniej przeanalizować ekspresję genu reniny w SMG, zebraliśmy RNA z 4 samców i 4 samic TgM z sekwencjami WT lub mutacjami CNRE (Figura 3H). Ponieważ poziom mRNA Ren-2 w SMG był około 100-krotnie wyższy niż w przypadku Ren-1D, a ponieważ nasz zestaw starterów do amplifikacji endogennych transkryptów reninowych był wspólny dla obu sekwencji Ren-2 i Ren-1D, endogenna renina na rysunku 3H prawdopodobnie odzwierciedla głównie ekspresję Ren-2. Zgodnie z oczekiwaniami z faktu, że ekspresja genu reniny w SMG jest regulowana przez testosteron (28), poziom Tg Ren-1C, jak również endogenna ekspresja genu Ren-2 była wyższa u mężczyzn niż u kobiet (Figura 3H). Chociaż ekspresja genu Tg Ren-1C była zmienna, nie zaobserwowano znaczącej różnicy między WT a mutacją CNRE TgM. Wyniki te pokazują, że CNRE nie odgrywa znaczącej roli w podstawowej aktywności promotora reniny w tkankach nadnerczy, w tym w SMG. W ostrym kontraście z jego niezbędną rolą w ekspresji genów nerek, nie zaobserwowano znaczącej różnicy w ekspresji genów nerkowych Ren-1C między WT i mut RP-2 TgM (Figura 3G). Wynik ten pokazuje, że RP-2 / PPE jest specyficznym elementem aktywującym komórki JG; ponadto, pojedyncza substytucja nt w RP-2 / PPE nie całkowicie zakłóca aktywność promotora Ren-1C w tkankach nadnerczy. Ekspresja nerkowa Tg w odpowiedzi na bodźce fizjologiczne. Testowaliśmy w celu określenia, czy loci Tg CNRE reagowały na bodźce fizjologiczne, o których wiadomo, że modyfikują ekspresję genu reniny. Półilościowa analiza RT-PCR RNA z nerek 8-tygodniowej męskiej TgM ujawniła, że obniżona dieta o wysokiej zawartości soli i indukowana odwodnieniem endogenna ekspresja genu Ren-2 i Ren-1D odpowiednio o 20% . 50% i 50% ( Figura 4A). Ekspresja genu Ren-1C z obu loci mut i WT CNRE Tg reagowała normalnie na oba bodźce (Figura 4A), pokazując, że CNRE jest zbędne do odpowiedzi na te bodźce. Ryc. 4 Wpływ bodźców fizjologicznych na ekspresję genu reniny w WT i TgM. (A) ekspresja mRNA reniny w WT CNRE i mut CNRE TgM traktowane dietą wysokosodową (HS) lub dehydratacją (DH). Dwie grupy mężczyzn TgM (w wieku 8 tygodni) karmiono przez 5 dni dietą o wysokiej zawartości sodu (8%) lub normalnej zawartości sodu (0,6%, C dla kontroli). W innej grupie dostęp do wody pitnej był ograniczony przez dzień (DH). RNA wyizolowano z nerki i analizowano za pomocą półilościowego RT-PCR z użyciem 2 zestawów par primerów, jednego koagulującego genu Tg Ren-1C (Tg) i endogennego Ren-2 i Ren-1D (endo.) I innego specyficznego dla genu Gapdh. (Top). Względną ilość mRNA reniny po normalizacji do Gapdh określono przez 3 niezależne RT-PCR dla 3 osobników w każdej grupie (na dole). Wartość ekspresji nieleczonych zwierząt kontrolnych w każdej grupie została arbitralnie ustalona na 100. (B i C) ekspresja mRNA reniny w TgM traktowanym z lub bez kasprilu
[patrz też: allegro hantle, bazofile poniżej normy, bazofile podwyższone ]