Środek kontrastowy rozpoznający aktywowane płytki krwi ujawnia mysią patologię malarii mózgowej niewykrywalną za pomocą konwencjonalnego MRI ad 10

MPIO skoniugowane z przeciwciałem LIBS są określane tutaj jako LIBS-MPIO, MPIO skoniugowane z przeciwciałami kontrolnymi są określane jako kontrolne MPIO. W celu zbadania właściwości wiążących środka kontrastowego LIBS-MPIO uzyskano krew od zdrowych ludzkich ochotników. Badania na ludziach zostały sprawdzone i zatwierdzone przez Komisję Etyki Badań Alfreda (Melbourne, Victoria, Australia). Uzyskano świadomą zgodę wszystkich uczestników badania. Po odwirowaniu pełnej krwi (228 gw ciągu 10 minut), 50 ul osocza bogatopłytkowego inkubowano z 20. M ADP (silny aktywator płytek krwi) lub nośnikiem na szkiełku mikroskopowym. Zastosowano LIBS-MPIO, kontrolne MPIO lub niefunkcjonalizowane MPIO i inkubowano przy ciągłym i ostrożnym obrocie. Po 10 minutach szkiełka płukano i pokrywano szkiełkiem, i oceniano wiązanie MPIO. Model malarii u myszy. Samice myszy C57BL6 zakupiono od Charles River. Infekcje zainicjowano przez wstrzyknięcie ip 106P. berghei ANKA. zarażone pasożytami rbcs na mysz. Parazytemia i stan zdrowia były monitorowane codziennie zgodnie z naszą licencją Home Office w Wielkiej Brytanii. Wszystkie doświadczenia na zwierzętach zostały sprawdzone i zatwierdzone przez brytyjskie Ministerstwo Spraw Wewnętrznych (Londyn, Zjednoczone Królestwo). Poziom parazytemii oceniano na rozmazach krwi po barwieniu Giemsą. Mikroiniekcja stereotaktyczna rekombinowanych cytokin. Model malarii jest specyficzny dla myszy, ale wyniki histologiczne po mikroiniekcji cytokin w mózgu szczura lub myszy są zachowane (15, 29, 37, 38). Tak więc wykorzystaliśmy szczury lub myszy, w zależności od dostępności przeciwciał komplementarnych, w celu zbadania profilu wiązania płytek i integralności naczyń krwionośnych po mikroiniekcji cytokiny do mózgu. Szczurze rekombinowane TNF i IL-1 p zostały uzyskane z Narodowego Instytutu Standardów Biologicznych i Kontroli (NIBSC). Szczurze rekombinant LT-a i rekombinowany mysi TNF zakupiono od R & D Systems. Cytokiny rozpuszczono w soli fizjologicznej wolnej od endotoksyn (nośnik). Cytokiny zawierały maksymalnie 100 IU endotoksyny / mg cytokiny (co odpowiada 10 częściom na milion), co w świetle wcześniejszych badań (39) uznano za nieistotne w kontekście tych eksperymentów. Użyliśmy 12-tygodniowych samców szczurów Wistar lub 8-tygodniowych myszy NMRI do wstrzyknięcia rekombinowanych cytokin (Charles River). Zarówno szczury jak i myszy zareagowały na wstrzyknięcie cytokin w identyczny sposób. W każdym eksperymencie wykorzystano co najmniej 3 zwierzęta na grupę. Wszystkie zabiegi chirurgiczne wykonywano pod mikroskopem operacyjnym (Wild M650; Leica). Operację stereotaktyczną przeprowadzono jak opisano wcześniej (40). Pokrótce, znieczulone szczury trzymano w ramie stereotaktycznej. W czaszce wywiercono niewielki otwór i .g TNF lub LT-a, ng IL-1 (3 lub solanki w objętości .l dla szczurów lub 0,5 .l dla myszy wszczepiono mikro-do prążkowia (obszar miąższu mózgu zawierający szarą i białą masę) ze szklaną igłą kapilarną (końcówka <50 .m). Kolekcja tkanek. Po odpowiednim czasie przeżycia zwierzęta były głęboko znieczulone pentobarbitonem sodu. Przezsercowe perfuzje przeprowadzono stosując heparynizowaną sól fizjologiczną. Tkanka została usunięta i zamrożona w ciekłym azocie lub osadzona w Tissue Tek i zamrożona do badania histologicznego. Identyfikacja leukocytów i płytek krwi. Z bloków tkanek wycięto zamrożone 10-. M grube seryjne przekroje wieńcowe. Stosując immunohistochemię identyfikowano neutrofile przy użyciu surowicy HB199 przeciw neutrofilowi (41), aktywowane komórki mikrogleju i rekrutowane monocyty zidentyfikowano przy użyciu ED-1 i przeciwciała rozpoznającego lizosomalny marker błonowy na komórkach szpikowych (Serotec) i zidentyfikowano całkowite rekrutowane leukocyty. stosowanie wspólnego markera antygenowego leukocytów za pomocą kombinacji przeciwciał OX1 i OX30 (Serotec i Cedarlane Laboratories Ltd.) [podobne: bol zeba po leczeniu kanalowym, choroba duhringa zdjęcia, razer kraken allegro ]