Środek kontrastowy rozpoznający aktywowane płytki krwi ujawnia mysią patologię malarii mózgowej niewykrywalną za pomocą konwencjonalnego MRI ad 11

W mózgu komórki ED-1 (3 dodatnie podzielono na komórki miąższowe i związane z naczyniami. Komórki parenchymalne zdefiniowano jako te, które były obecne na powierzchni światła naczynia i w miąższu; komórki związane z naczyniami zdefiniowano jako komórki przylegające do powierzchni światła układu naczyniowego. Liczbę komórek dodatnich obecnych w mózgu określono ilościowo. Dla każdej sekcji tkanki wybrano 4 reprezentatywne pola, a średnią liczbę komórek dodatnich obliczono i wyrażono jako liczbę komórek na mm2. Przeciwciało monoklonalne GPIIa anty-szczurzej płytkowe p55 PG55 było rodzajem prezentu od Kirin Brewery Co. Ltd. Liczbę pozytywnych elementów płytek obecnych w mózgu określono ilościowo. Dla każdej sekcji tkanki wybrano 6 reprezentatywnych pól, a średnią liczbę elementów pozytywnych obliczono i wyrażono jako liczbę elementów dyskretnych na mm2. Do wykrywania płytek krwi u myszy zastosowanych do MRI in vivo, płytki myszy wykrywano stosując szczurze przeciwciało poliklonalne glikoproteiny IIb (CD41) przeciw myszy (Clone MWReg30, GeneTex) w rozcieńczeniu 1:25 przez noc w 4 ° C. Pierwotne przeciwciało wykrywano stosując królicze biotynylowane przeciwciało drugorzędowe przeciw króliczycy (Vectastain ABC-AP Kit, Vector Laboratories) i alkaliczną reakcję fosforanową (zestaw II substratu fosfatazy alkalicznej; Vector Laboratories). Fragmenty mózgu wybarwione w krezolowo-fioletowej analizowano pod kątem obecności MPIO. Cyfrowe zdjęcia mikroskopii świetlnej sekcji histologicznych rejestrowano za pomocą kamery kolorowej Cool Snap Pro (Media Cybernetics) zamontowanej na mikroskopie świetlnym (Leica DMR). Podwójnie i potrójnie znakowana immunohistochemia i immunofluorescencja. Zamrożone 10-. M przekroje wieńcowe utrwalono w etanolu. Królicze przeciwciało poliklonalne do GLUT-1 zastosowano do identyfikacji powierzchni naczyń w mózgu. Transporter glukozy został wcześniej ustalony jako obecny zarówno po stronie światła, jak i podświetlenia wszystkich naczyń w mózgu (22). Przeciwciało GLUT-1 było darem od I. Simpsona (Penn State College of Medicine, Hershey, Pennsylvania, USA). GLUT-1 wykryto stosując standardowe procedury ABC, jak opisano powyżej i ujawniono za pomocą diaminobenzydyny (DAB, brązowy osad). ED-1 został następnie zidentyfikowany przy użyciu immunohistochemii i ujawniony przy użyciu VIP (niebieski osad, Vector Laboratories), jak opisano powyżej. W przypadku immunofluorescencji podwójnego znakowania, GLUT-1 ujawniono za pomocą kurczaka przeciw króliczej Alexa Fluor 636 (Invitrogen), a ED-1 zidentyfikowano za pomocą anty-ED-1 bezpośrednio znakowanego FITC (Serotec), zgodnie z danymi producenta. instrukcje. Skrawki analizowano za pomocą laserowej mikroskopii konfokalnej. Prezentowane podwójne obrazy to wszystkie rekonstrukcje 3D, w których AF-636 jest prezentowany jako niebieskie etykiety, a FITC jako czerwone etykiety. Prezentowane obrazy potrójnie poplamione są rekonstrukcjami 3D, w których AF-636 (GLUT-1) jest prezentowany jako niebieskie oznakowanie, FITC (ED-1) jest pokazany jako zielone etykietowanie, a RITC (płytki) jest pokazane jako czerwone etykiety. MRI in vivo myszy CM. Dane MRI uzyskano za pomocą magnesu o otworach pionowych 7-Tesla ze spektrometrem Varian Inova (Varian). Zwierzęta (n = 3 na grupę) zobrazowano w dniach 6 i 7 po inokulacji. Jedno dodatkowe zwierzę zobrazowano w dniu 5. Zwierzęta znieczulono 0,5% -1,5% izofluranem w 70% N2O i 30% O2 i umieszczono w rezonatorze Aldermana-Granta. Częstość akcji serca, monitorowana za pomocą EKG, utrzymywano na poziomie około 500 550 550 uderzeń na minutę u wszystkich zwierząt, a temperaturę ciała utrzymywano na poziomie 37 ° C za pomocą zgodnego z MRI koca i sondy domowej. Mapy T2 (czas echa [TE], 0,02, 0,04 i 0,06 s) uzyskano, a regiony będące przedmiotem zainteresowania (hipokamp, kora i prążkowie) wybrano na plastrze w tej samej pozycji, co te przedstawione na Figurze 1, A i do
[hasła pokrewne: przedszkole wesołe skrzaty pobiedziska, całując się z językiem wymieniasz, choroba scheuermanna operacja ]