Wczesne niepowodzenie punktu kontrolnego G2 / M jako mechanizmu molekularnego leżącego u podłoża aberracji chromosomowych wywołanych etopozydami ad 10

Wraz z danymi klinicznymi, w których skumulowana dawka epipodofilotoksyny nie wydaje się mieć pierwszorzędnego znaczenia dla określenia ryzyka wystąpienia wtórnej białaczki (6), nasze wyniki są zgodne z interpretacją, że ograniczone okno stężenia inhibitora Topo II powoduje translokacje chromosomów. Nasze dane wskazują również, że translokacje chromosomowe indukowane przez etopozydy nie są ograniczone do locus MLL i byłyby indukowane w dowolnym innym loci na chromosomie 11. Nie jest to niespodziewane, biorąc pod uwagę funkcję Topo II (17). Doniesiono, że inhibitory Topo II powodują wtórną białaczkę z translokacjami chromosomalnymi obejmującymi geny inne niż MLL, takie jak t (8; 21), t (15; 17), t (9; 22), t (11; 20), oraz inni (40. 42). Niedawno wykazano, że ostra białaczka promielocytowa związana z mitoksantronem z translokacją t (15; 17) jest jednym z najczęstszych wtórnych nowotworów, które pojawiają się po leczeniu raka piersi (43. 45). Testy cięcia DNA in vitro Topo II . ujawniły również, że mitoksantron rozszczepia gen PML w tajemniczym miejscu wrażliwym na Topo II (46). Nie wiadomo, jak określona jest specyficzność translokacji chromosomowych, ale wymagałoby to złożonych zależności między typami inhibitorów Topo II, dodatkowych leków przeciwnowotworowych lub stresu środowiskowego i stopnia aktywnego cyklu celowanych tkankowo komórek docelowych. W komórkach z nabytymi nieprawidłowościami chromosomowymi, klon (y) z przewagą wzrostu będą wybrane w zależności od translokacji i fuzji kluczowych genów transkrybowanych na sposoby specyficzne dla tkanek i różnicowania. Tak wyselekcjonowane komórki ostatecznie przechodzą do nowotworów złośliwych, poprzez nabycie dodatkowych krytycznych mutacji. W tym kontekście należy zauważyć, że układ krwiotwórczy obejmuje cykliczne komórki prekursorowe, w których gen MLL jest aktywnie transkrybowany, co podkreśla kluczową rolę translokacji LLL dla leukemogenezy (11. 14). Razem, nasze odkrycia podkreślają ważną rolę punktów kontrolnych G2 / M w zapobieganiu aberracji chromosomowych i przewidują możliwe wewnętrzne tło genetyczne predysponujące do zaburzeń chromosomalnych strukturalnych wywołanych etopozydami. Dalsza analiza genetyczna pacjentów z białaczką niemowląt i białaczką wtórną powinna dostarczyć nowych informacji na temat tego, jak i dlaczego te białaczki powstają w związku ze złożoną interakcją czynników ryzyka gospodarza i środowiska. Metody Komórki. Komórki GM00637Hmono1 (prawidłowe fibroblasty) subklonowano z GM00637H. Komórki GM05849C (fibroblasty pozbawione ATM) i komórki GM00637H otrzymano z Coriell Cell Repositories (Coriell Institute for Medical Research). Linię komórek Osteosarcoma U2OS uzyskano z banku Health Research Research Resources. Komórki GM05849C, GM00637Hmono1 i U2OS hodowano w DMEM uzupełnionym 10% FBS. Linia komórek BV173 z chromosomem Philadelphia pozytywną białaczkę hodowano w RPMI uzupełnionym 10% FBS. Komórki GM05849-pEBYZ5 i GM05849-pEBS7 otrzymano jak podano wcześniej (47). Oznaczenie akumulacji G2 / M, wczesny test punktu kontrolnego G2 / M, test zatrzymania mitotycznego i test z eliminacją fazy M. W przypadku testów akumulacji G2 / M komórki eksponowano na różne stężenia etopozydu (Sigma-Aldrich) przez 16 godzin. Komórki utrwalono 70% etanolem i potraktowano RNazą (QIAGEN) i jodkiem propidyny (PI) (Sigma-Aldrich), a następnie ponad 10 000 komórek analizowano za pomocą cytometrii przepływowej (BD). Rozkład cyklu komórkowego analizowano przy użyciu ModFit LT (BD). W przypadku wczesnego testu punktu kontrolnego G2 / M komórki inkubowano z różnymi stężeniami etopozydu w obecności kolagenu 25 ng / ml (Sigma-Aldrich) przez 3 godziny. W celu oznaczenia mitozy, komórki fazy M oczyszczano przez wytrząsanie po potraktowaniu etopozydem lub DMSO (Sigma-Aldrich) przez 3 godziny i ponownie inkubowano na płytkach powleczonych kolagenem przez 2 godziny odpowiednio z etopozydem lub bez niego.
[podobne: choroba duhringa zdjęcia, ginekolog kraków ruczaj, bol zeba po leczeniu kanalowym ]