Wczesne niepowodzenie punktu kontrolnego G2 / M jako mechanizmu molekularnego leżącego u podłoża aberracji chromosomowych wywołanych etopozydami ad 13

Preparaty barwiono PI (2,5 .g / ml), a komety analizowano przy użyciu odwróconego mikroskopu epifluorescencyjnego przy powiększeniu x20. Na koniec analizowano 70 komórek na szkiełko przy użyciu Scion Image (Scion Corp.) z makroskopem kometowym scion_comet1.3 (49) dla momentu ogona. Test inkorporacji BrdU. Fibroblasty pozbawione ATM pozytytycznego G1 inkubowano z 10. M BrdU z lub bez 2,5 mM tymidyny przez 24 godziny. Komórki zebrano i przetworzono stosując zestawy BrdU Flow (BD Biosciences. Pharmingen) zgodnie z protokołem dostarczonym przez producenta. Ponad 10 000 komórek analizowano za pomocą cytometrii przepływowej. Test wyliczający składnik kolonii. Fibroblasty opioidowe pozbawione G1 ATM, poddane wstępnej obróbce z dodatkiem lub bez 1. M etopozydu, dalej hodowano w pożywce wolnej od etopozydu. Po 2 lub 8 dniach komórki zebrano i x 104 komórek powtórzono na naczyniach powleczonych kolagenem. Po 7 dniach komórki poddano barwieniu Giemsą. Liczby komórek w 100 losowo wybranych koloniach określono pod obserwacją mikroskopową przy powiększeniu x 100, a następnie podzielono na 3 kategorie, kolonie złożone z lub 2 komórek, 3 x 29 komórek lub 30 lub więcej komórek. Podziękowania Jesteśmy wdzięczni Y. Shiloh za życzliwy prezent pEBSYZ5. Dziękujemy L. Wiedemann za krytyczne komentarze i dyskusje. Praca ta została wsparta dotacją Ministerstwa Edukacji, Nauki i Kultury w Japonii oraz dotacją na badania nad rakiem z Ministerstwa Zdrowia i Opieki Społecznej w Japonii. Przypisy Niestandardowe skróty: ATM, ataksja-teleangiektazja zmutowana; BCR, region klastrów breakpoint; Sonda CH11C, sonda specyficzna dla chromosomu 11 centromeru; DSB, przerwa dwuniciowa; A-H2AX, fosfo-histon H2AX; MLL, białaczka mieszana / białaczka mieloidalna limfocytowa mieszana; MOI, wskaźnik obejścia fazy M; PI, jodek propidyny; 11q23, pasmo chromosomu 11 q23; Topo II, topoizomeraza II. Konflikt interesów: Autorzy zadeklarowali brak konfliktu interesów. Informacje referencyjne: J. Clin. Invest.116: 80. 89 (2006). doi: 10.1172 / JCI25716
[patrz też: choroba dercuma, chondropatia rzepki, bol zeba po leczeniu kanalowym ]