Odkrycia w komórkach BV173 doprowadziły nas do hipotezy, że zakłócenie punktów kontrolnych G2 / M może pozwolić na wejście uszkodzonych komórek do mitozy, prowadząc następnie do segregacji sygnałów sondy 11q23 w M lub pomitycznej fazie G1. W celu zebrania komórek w fazach G2, M i postmitotycznych G1 w obecności etopozydu, zastosowano komórki adherentne, w których komórki fazy M są łatwo wzbogacone przez wstrząsanie, nawet jeśli przegrupowania MLL były zwykle obserwowane w nieprzylegających komórkach hematopoetycznych. Komórki z niedoborem ATM mają funkcjonalne G2 i dysfunkcjonalne wczesne punkty kontrolne G2 / M. Komórki z niedoborem ATM, które zostały uszkodzone przez promieniowanie jonizujące w fazie S, akumulują się w fazie G2, gdy wchodzą w fazę mitozy, gdy DNA ulega uszkodzeniu w fazie G2 (34). Aby potwierdzić aktywność punktu kontrolnego cyklu komórkowego na ekspozycji na etopozyd, porównaliśmy rozkład cyklu komórkowego transformowanego SV-40 pz niedoborem ATM (GM05849C) i normalnego (GM00637Hmono1) fibroblastów skóry w obecności etopozydu. W obu liniach komórki kumulowały się w fazie G2 / M po traktowaniu eteremidem .M przez 16 godzin (Figura 2A i dane nie pokazane dla normalnych fibroblastów). Dane te wskazują, że .M etopozyd najwyraźniej wyzwalał punkt kontrolny akumulacji G2 w odpowiedzi na uszkodzenie DNA, niezależnie od obecności lub nieobecności ATM. Aby przeanalizować wczesną odpowiedź na leczenie etopozydem, komórki inkubowano z etopozydem razem z kolcemidem przez okres do 3 godzin, a następnie analizowano pod kątem procentu M komórek fazy. Podczas 3-godzinnej inkubacji około 3. 5% komórek w każdej z linii weszło i zakumulowało się w fazie M pod nieobecność etopozydu (Figura 2B). Gdy normalne fibroblasty były eksponowane na 5 lub 25 .M etopozydu, populacja fazy M była znacznie zmniejszona (Figura 2, B i C). W przeciwieństwie do tego, znaczna populacja fibroblastów z niedoborem ATM weszła w mitozę pod wpływem 5. M lub 25. M etopozydu, chociaż ta ostatnia była mniej eksponowana (Figura 2, B i C). Dane te wskazują, że fibroblasty pozbawione ATM nie są skuteczne we wczesnej kontroli punktu kontrolnego G2 / M w odpowiedzi na uszkodzenie DNA wywoływane przez etopozydy. Rycina 2 – brak fibroblastów i komórki U2OS wykonują mitozę w obecności etopozydu o niskiej dawce. (A) zawartość DNA analizowana w fibroblastach pozbawionych ATM po potraktowaniu wskazanymi stężeniami etopozydu przez 16 godzin. Wskazano odsetek komórek w fazach S i G2 / M. (B i C) Procenty komórek fazy M analizowanych przed i po ekspozycji na etopozyd razem z kolcemidem przez 3 godziny w normalnych fibroblastach pozbawionych ATM. (B) Przedstawiono reprezentatywne dane analizowane za pomocą cytometrii przepływowej. Kropki reprezentujące komórki fazy M są zamknięte w kwadratach. (C) Względny przyrost procentowej liczby komórek fazy M pod wpływem leczenia etopozydem obliczono w stosunku do wartości pozornej. Odcięta jest logarytmiczna (0 pokazano osobno). Dane na wykresie przedstawiają średnią. SD z 3 oddzielnych eksperymentów. (D) Analiza metodą cytometrii przepływowej frakcji fazy M fibroblastów pozbawionych ATM. Komórki zebrano wkrótce po strząsnięciu i inkubowano przez dodatkowe 2 godziny z 0 lub 4 .M etopozydu. (E) MOI, obliczone jak opisano w Methods. Zawartość DNA analizowano we frakcji BrdU-ujemnej normalnych i pozbawionych ATM fibroblastów po 1- lub 5-godzinnej terapii. (F i G) Względne MOI w obecności etopozydu obliczone na MOI pod nieobecność. Komórki traktowano wskazanymi stężeniami etopozydu. Dane reprezentują średnią. SD z 3 oddzielnych eksperymentów. (F) Względna MOI normalnych fibroblastów pozbawionych ATM i komórek U2OS. Odcięta jest logarytmiczna (0 pokazano osobno). (G) Względna MOI fibroblastów pozbawionych ATM z (pEBSYZ5) i bez uzupełnienia ATM (pEBS7). Fibroblasty z niedoborem ATM wychodzą z fazy M w obecności etopozydu
[podobne: choroba duhringa zdjęcia, bazofile poniżej normy, bazofile podwyższone ]
Comments are closed.
to lepiej na wszelki wypadek wyciąć
[..] odnosnik do informacji w naukowej publikacji odnosnie: seksuolog warszawa[…]
nauka i medycyna jest potrzebna
Article marked with the noticed of: analiza cen[…]
Chcesz jeść zdrowo – nie kupuj w marketach
[..] Artukul zawiera odniesienia do tresci: usuwanie zmarszczek botox[…]
Dobry i rzeczowy artykuł